DNA提取實(shí)驗(yàn)步驟(磁珠法)
發(fā)表時(shí)間:2023-09-19DNA提取實(shí)驗(yàn)步驟(磁珠法)
核酸是在生物界中異常重要的生物大分子。其在生物活動(dòng)中扮演著最為重要的角色,繁衍、發(fā)育、保持形態(tài)、衰敗于死亡等一切生物活動(dòng)中都有其的參與。在新世紀(jì),核酸是所有生命科學(xué)學(xué)科的熱門研究課題,其是生物化學(xué),遺產(chǎn)學(xué)等生物學(xué)科的基礎(chǔ),其廣度與深度是絕大多數(shù)學(xué)科都難以望其項(xiàng)背的。
要進(jìn)行核酸研究,就需先將核酸從繁雜的生物大分子中提取出來,再將提取出的核酸去雜純化,達(dá)到一定純度后,方可用于科研或實(shí)際應(yīng)用。
現(xiàn)在,我將給大家分享一下DNA提取實(shí)驗(yàn)步驟(磁珠法),為看到文章的大家提供科研與實(shí)際應(yīng)用上的幫助。
DNA提取(磁珠法)是一種很常見的分子生物學(xué)技術(shù),它利用磁性珠子來分離和純化DNA分子。其原理可以概括為以下幾個(gè)步驟:
一、細(xì)胞破碎
首先,需要將細(xì)胞或組織樣本破碎,以釋放DNA。這可以通過機(jī)械方法(如機(jī)械破碎或超聲波破碎),化學(xué)方法(堿性溶液)或酶作用(加入蛋白酶或溶菌酶)來實(shí)現(xiàn)細(xì)胞破裂,將DNA釋放。
二、結(jié)合磁珠
將具有磁性的微小珠子(表面帶負(fù)電)添加到樣品中,而磁珠buffer是帶正電荷的鹽離子,樣本被其影響,磷酸基團(tuán)帶有負(fù)電荷,磁珠從而與DNA結(jié)合。
三、分離洗滌
DNA含有高能磷酸骨架,因此其親水性比蛋白質(zhì),脂肪,多肽等大分子生物物質(zhì)強(qiáng)??筛鶕?jù)這一理化性質(zhì),用層析,梯度離心法等方法將其分離純化。也可根據(jù)其他理化性質(zhì)的差異將DNA與其他生物大分子分離。在實(shí)驗(yàn)室中,無水乙醇沉淀法是最常見的分離DNA的方法。乙醇不與核酸發(fā)生化學(xué)反應(yīng),還能與水相混相融,是最理想的沉淀劑。乙醇能夠與DNA周圍的水分子結(jié)合,使得DNA失水從而聚合。為去除可能殘存在DNA分子上的雜質(zhì),會(huì)多次洗滌磁珠和DNA,以確保DNA純度。
四、釋放DNA
最后,通過改變條件(通常是改變溫度或加水、EB來破壞高鹽環(huán)境形成低鹽環(huán)境)來解除DNA與磁珠的結(jié)合,從而將純化的DNA從磁珠上釋放出來。
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