細(xì)胞培養(yǎng)（細(xì)胞克隆技術(shù)），是一種在人為創(chuàng)造的與體內(nèi)環(huán)境相似的條件下（無菌*、溫度和ph適宜、營養(yǎng)條件良好），培養(yǎng)和維持生物細(xì)胞的生長和增殖的技術(shù)。而傳代培養(yǎng)是細(xì)胞培養(yǎng)中的一項(xiàng)關(guān)鍵步驟，它涉及將已培養(yǎng)的細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)皿或容器中分離出來，并將它們重新種植到新的培養(yǎng)皿或容器中，以繼續(xù)細(xì)胞的生長和擴(kuò)增。傳代培養(yǎng)有助于保持細(xì)胞的健康狀態(tài)、增加細(xì)胞數(shù)量以提供大量可用于實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞。

細(xì)胞培養(yǎng)——傳代培養(yǎng)根據(jù)細(xì)胞種類不同一般可分為貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)兩大類型。

一、貼壁培養(yǎng)

貼壁培養(yǎng)一般是指貼壁依賴型細(xì)胞附著在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶的底部，以在表面附著生長。這種培養(yǎng)方法廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和生產(chǎn)中，尤其是在體外細(xì)胞研究和藥物開發(fā)領(lǐng)域。

貼壁培養(yǎng)操作步驟：

1. 傳代前觀察細(xì)胞形態(tài)與密度，細(xì)胞生長密度為80%-90%時(shí)，適宜傳代。

2. 棄掉培養(yǎng)液，用PBS清洗1-2次。

3. 加入可覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底的含EDTA的胰蛋白酶。

4. 將培養(yǎng)瓶放進(jìn)37°C恒溫CO2培養(yǎng)箱中，2-5分鐘后于顯微鏡下觀察，當(dāng)70%-80*細(xì)胞收縮，間隙變大后，輕輕拍打培養(yǎng)瓶后加入培養(yǎng)液中止消化（2倍胰蛋白量），混合均勻以免消化過度。

5. 將細(xì)胞懸液以1000rpm/min離心3~5min。（根據(jù)細(xì)胞種類的不同，可調(diào)整轉(zhuǎn)速和時(shí)間）

6. 丟棄上清液，重懸細(xì)胞，輕晃拍打，使細(xì)胞均勻。

7. 取適量細(xì)胞懸液，重新接種，搖勻放于37°C恒溫CO2培養(yǎng)箱。

8. 觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，以進(jìn)行換液、傳代。

二、懸液培養(yǎng)

懸浮培養(yǎng)是指細(xì)胞在受到不斷攪動(dòng)或搖動(dòng)的液體培養(yǎng)基中以懸浮狀態(tài)生長，而不是附著在培養(yǎng)器具的表面上。這種培養(yǎng)方法適用于許多不附著于固體表面的細(xì)胞類型，如血液細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、某些腫瘤細(xì)胞等。

懸液培養(yǎng)操作步驟：

1. 直接傳代

立起細(xì)胞瓶，使細(xì)胞沉降，吸取1/2-2/3上清去掉，再重懸細(xì)胞，接種至新培養(yǎng)瓶中，搖勻，放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2. 離心傳代法

將細(xì)胞懸液以1000rpm/min離心3~5min，棄除上清液，重懸細(xì)胞，搖勻，將適量懸液接種之新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足營養(yǎng)液，搖勻，放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)——傳代培養(yǎng)維持細(xì)胞生長、獲得大量用于實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，是科研中極為重要的一環(huán)。

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